domenica 29 marzo 2009

Test di agglutinazione con schedine a micro colonne



Oggi molti test di agglutinazione sono eseguiti utilizzando le schedine con micro colonne di gel o di microsfere. Queste presentano il vantaggio di abbreviare spesso i tempi di esecuzione, di ridurre la quantità dei siero ed di emazie utilizzate (sia di quelle dei kit commerciali che quelle del paziente) e soprattutto di dare un risultato stabile, e quindi oggettivo, che può essere verificato in momenti successivi e per alcune ore, che può essere facilmente registrato ed accuratamente interpretato anche con sistemi di lettura elettronici.(...)

Le schedine possono essere utilizzate sia per la agglutinazione diretta che per l’esecuzione del test di coombs’ indiretto. La differenza, oltre al tempo di incubazione, è che nel caso di del test di coombs si utilizzano schedine specifiche che contengono nel gel il siero antiglobulina umana.
La metodica prevede

· la dispensazione di una piccola aliquota (es 10 µl) di sospensione di emazie (in genere al 3%) in soluzione fisiologica (per l’agglutinazione diretta) o con aggiunta di in LISS – Soluzione a Bassa Forza Ionica - (nel caso del test di coombs) nel pozzetto sopra la micro colonna( 40-50 µl a seconda del Kit commerciale).

· La dispensazione di siero o plasma ( 40-50 µl a seconda del Kit commerciale).
Nota:nelle schedine per la determinazione del gruppo AB0-Rh l’antisiero è già presente nel pozzetto

Nel caso del test di Coombs Indiretto la incubazione in appositi termostati per schedine a 37° per 10-20 minuti . In caso di agglutianzione diretta in fisiologica si procede direttamente alla centrifugazione.

La centrifugazione a in apposite centrifughe per schedine per 5-10 minuti.

Nota: Nel caso del TCI in schedina il tempo di esecuzione è ridotto in confronto alla metodica in provetta dal fatto che viene routinariamente utilizzato il LISS (soluzione a bassa forza ionica) che abbrevia la fase di incubazione ed in oltre nel metodo in microcolonne non è più necessaria la fase di lavaggio delle emazie per eliminare le immunoglobuline che potrebbero inattivare il siero antiglobulina.

Interpretazione:
Se le emazie si depositano omogeneamente nel fondello non vi è stata agglutinazione e la reazione è negativa.
Se le emazie restano intrappolata ad un qualsiasi livello della micro colonna o so solo il fondello non è omogeneo ma sfilacciato a colata verso l’alto la reazione deve essere considerata positiva . E’ possibile , anche utilizzando lettori automatici, dare un valore quantitativo alla agglutinazione.

Nessun commento: